bigpo.ru
добавить свой файл
  1 ... 55 56 57 58





134 Гончаренко Г. Г.  Основы  генетической  инженерии  
 
тетрациклин.  Затем  перенести  реплику  (отпечаток)  колоний  на  среду, 
содержащую  канамицин.  Так  как  ген  устойчивости  к  канамицину 
отключен  из-за  вставки,  то  бактерии  трансформированные  гибридными 
плазмидами,  не  будут  расти  на  среде,  содержащей  канамицин.    Колонии 
устойчивые  к  тетрациклину,  но  чувствительные  к  канамицину,  и  будут 
искомыми. 
.    Удалось.  Так  как  в  результате  вставки  чужеродной  ДНК  в 
плазмиду  pUC18  произошло  нарушение  работы  гена    lac  Z,  то 
бактериальные  клетки  содержащие  плазмиды  со  встроенной  ДНК 
образовали неокрашенные колонии, а не синие.   
.    
  
  
й
й
о
о
н
н
 
ен
 
ен
о
К
о
К
Н
Н
Д
стр
Д
стр
 в
ез в
С
Б
2.5 kb 
1 kb 
0,2 kb 
 
.     
  
  
й
й
о
о
н
н
 
ен
 
ен
о
К
о
К
Н
Н
Д
стр
Д
стр
 в
ез в
С
Б
2.7 kb 
1 kb 
0,5 kb 
 
 
5. Фаговые и космидные вектора и создание геномных 
библиотек 



Гончаренко Г. Г.  Основы  генетической  инженерии  
135
 
Тест 5.1 
Ниже  приведены  4  правильных  ответа  для  8  задач  (4.1  –  4.8). 
Поставьте в ответах те номера задач, которые им соответствуют.  
.  Никакой,  поскольку  величина  обеих  фрагментов  существенно 
меньше 15 кб. 
.  Величина  соответствующей  -глобиновой  кДНК,  составит  около 
462  нуклеотидных пар. 
.  Да  удастся  в  любой  плазмиде  например  pSC101,  pBR322  или 
pUC18 если к данному фрагменту человеческой ДНК подшить с помощью 
ДНК-лигазы  линкерную  последовательность  допустим  ГААТТЦ  для 
действия рестриктазы EcoRI.  
. У линкера для данной кДНК, что бы её можно было клонировать в 
плазмиде 
pBR322 
по 
маркёру 
устойчивости 
к 
ампиницилину 
последовательность должна быть ЦТГЦАГ для действия рестриктазы PstI, 
расположенной в структуре гена Арr. 
. У линкера для данной кДНК, что бы её можно было клонировать в 
плазмиде 
pBR322 
по 
маркёру 
устойчивости 
к 
ампиницилину 
последовательность должна быть ГААТТЦ для действия рестриктазы PstI, 
расположенной в структуре гена Арr. 
Тест 5.2 
Ниже приведены 3 правильных ответа для 6 задач (4.9 – 4.14). 
Поставьте в ответах те номера задач, которые им соответствуют 
.  Да  можно,  поскольку  EcoRI  будет  разрезать  ДНК  дрожжевого 
грибка  на  различные  фрагменты  (величина  4096  н.  п.  является  только 
средней), в том числе и на фрагменты длиной около 15 кб, которые легко 
встроятся в фаг λ (λ-вектор) для последующего размножения в E. coli  
. 
Минимальное 
число 
различных 
клонов 
содержащих 
отличающиеся  фрагменты  ДНК  человека  составляющих  геномную 
библиотеку в данном случае будет 45776 + 23 или 45799. 
.  Поскольку  структурный  ген  у  высших  эукариот  всегда 
существенно  длиннее,  чем  кДНК  электрофоретический  спектр  их 
образцов  после  Саузерн-блот  гибридизации  на  радиоавтограмме  будет 
выглядеть 
г
о
 
н
а 
следующим 
К
р
 
Н
ту
К
Д
к
 ген
Н
образом:  
у
о
Д
к
стр
 
 



136 Гончаренко Г. Г.  Основы  генетической  инженерии  
 
 
 
 
 
 
 
.  Электрофоретический спектр ДНК двух образцов после Саузерн-
блот гибридизации на радиограмме будет выглядеть следующим образом:  
 
г
о
 
н
а 
К
р
 
 
Н
ту
К
Д
к
 ген
у
о
Н
Д
стр
к
 
 
 
 
Тест 5.3 
Ниже  приведены  4  правильных  ответа  для  8  задач  (4.1  –  4.8). 
Поставьте в ответах те номера задач, которые им соответствуют.  
. Успешно клонировать данный фрагмент ДНК в бактериофаге λ  не 
удастся, т. к. его величина существенно меньше 15 кб. 
.  Да  сумеют,  поскольку  величина  тандемной  (двойной)  копии 
данного  гена  составит  около  41  кб  и  этот  фрагмент  ДНК  можно  будет 
успешно клонировать в космидном векторе.   
. Для того чтобы успешно клонировать кДНК гена Pgm дрозофилы в 
каком  либо  плазмидном  векторе  необходимо  к  кДНК  с  помощью  ДНК-
лигазы подшить удобную линкерную последовательность.  
.  Поскольку  рестриктаза  EcoRI  узнаёт  последовательность  ДНК, 
состоящую  из  шести  нуклеотидов  то  она  будет  разрезать  молекулу 
двухцепочечной  ДНК  в  среднем  один  раз  на  4096  нуклеотидных  пар.  И 
следовательно  минимальное  число  различных  клонов  содержащих 
отличающиеся  фрагменты  ДНК  Saccharomyces  cerevisiae,  составляющих 
геномную библиотеку этого вида будет 3296 + 1 или 3297. 

Гончаренко Г. Г.  Основы  генетической  инженерии  
137
 
.  Поскольку  EcoRI  узнаёт  последовательность  ДНК,  состоящую  из 
шести нуклеотидов то она будет разрезать молекулу двухцепочечной ДНК 
в  среднем  один  раз  на  4096  нуклеотидных  пар.  И  следовательно 
минимальное  число  различных  клонов  содержащих  отличающиеся 
фрагменты  ДНК  Drosophila  melanogaster,  составляющих  геномную 
библиотеку этого вида будет 24414+1 или 24415.  
Тест 5.4 
Ниже приведены 3 правильных ответа для 6 задач (4.9 – 4.14). 
Поставьте в ответах те номера задач, которые им соответствуют 
. 
Минимальное 
число 
различных 
клонов 
содержащих 
отличающиеся  фрагменты  ДНК  Drosophila  melanogaster  составляющих 
геномную библиотеку этого вида будет 24414+4 или 24418. 
Электрофоретические спектры обеих ДНК на электрофореграммах 
будут  существенно  отличаться.  ДНК  структурного  гена  у  эукариот 
существенно  длиннее  поскольку  всегда  содержит  последовательности 
интронов  и  другие  регуляторные  фрагменты  ДНК.  Поэтому  в  ходе 
электрофореза образец ДНК структурного гена будет двигаться медленнее 
чем кДНК. 
.  Нет  не  могут.  Полученные  три  фракции  на  радиограмме 
свидетельствую  о  том,  что  сайты  рестрикции  для  EcoRI  в  данном  гене 
имеются  в  интронах,  но  отсутствуют  в  экзонах.  Поэтому  рестриктаза 
EcoRI  дважды  порезала  ДНК  структурного  гена  в  интронной  части  и  ни 
разу в его кДНК (экзонной части).  

Да 
могут. 
Полученные 
три 
фракции 
на 
радиограмме 
свидетельствую  о  том,  что  сайты  рестрикции  для  EcoRI  в  данном  гене 
имеются  в  интронах,  но  отсутствуют  в  экзонах.  Поэтому  рестриктаза  
EcoRI дважды порезала ДНК структурного  гена в  интронной части,  и ни 
разу  в  его  кДНК.  Всё  это  говорит  о  том,  что  существует  три  копии 
данного гена в геноме морской свинки. 
6. Генная дактилоскопия и полный сиквенс (прочтение) 
нуклеотидных последовательностей ДНК 
Тест 6.1 
Ниже  приведены  4  правильных  ответа  для  8  задач  (4.1  –  4.8). 
Поставьте в ответах те номера задач, которые им соответствуют.  



138 Гончаренко Г. Г.  Основы  генетической  инженерии  
 
Полное совпадение спектров ДНК в двух образцах говорит о том, 
что  скорее  всего  они  были  взяты  у  одного  человека  (или  у  однояйцевых 
близнецов). 
.  Биологическим  отцом  данного  ребёнка  может  быть  только 
мужчина имеющий спектр ДНК №2. 
.  Из  семи  подозреваемых  преступником  мог  быть  только  человек 
обладающий спектром ДНК №3. 
.  Нуклеотидная  последовательность  первых  20  нуклеотидов  в 
рестрикционном 
фрагменте 
ДНК 
дрозофилы 
будет 
следующая: 
ТЦАЦТГЦЦЦ-ГЦТТТЦЦАГТЦ. 
.  Нуклеотидная  последовательность  первых  20  нуклеотидов  в 
рестрикционном 
фрагменте 
ДНК 
дрозофилы 
будет 
следующая: 
ТЦГЦТГЦЦГГ-ЦТАТЦЦАГТЦ. 
Тест 6.2 
Ниже приведены 3 правильных ответа для 6 задач (4.9 – 4.14). 
Поставьте в ответах те номера задач, которые им соответствуют 
.  Коэффициент  специфичности  нуклеотидного  состава  для  ДНК 
дрозофилы  по  результатам  анализа  первых  50  нуклеотидов  в  данном 
рестрикционном фрагменте ДНК составит 1.27. 
.  
  Г  А  Т   Ц 
 
 
 
 
 
. 
Последние  30  нуклеотидов  в  просиквенированном  фрагменте  ДНК 
человека 
будут 
иметь 
следующую 
последовательность: 
ТГАТЦГАГАГГГАААТЦААТТЦТГТГААЦГ.  
.  
  Г  А  Т   Ц 
 
 
 
 




Гончаренко Г. Г.  Основы  генетической  инженерии  
139
 
Тест 6.3 
Ниже  приведены  4  правильных  ответа  для  8  задач  (4.1  –  4.8). 
Поставьте в ответах те номера задач, которые им соответствуют.  
. Они могут быть только однояйцевыми близнецами. 
.  Предпологаемым  преступником  может  быть  только  человек 
имеющий спектр ДНК №3.  
.  Нуклеотидная  последовательность  рестрикционного  фрагмента 
ДНК мыши следующая: АЦГЦЦЦГААТАГЦЦЦАГАТТ  
.  Первые  40  нуклеотидов  во  фрагменте  ДНК  дрозофилы  будут 
иметь 
следующую 
последовательность: 
ТЦАЦТГЦЦЦГЦТТТЦЦАГТЦГГГАААЦЦТГТЦГТГЦЦАГЦ 
.  Первые  40  нуклеотидов  во  фрагменте  ДНК  дрозофилы  будут 
иметь 
следующую 
последовательность: 
ТЦАЦТГЦЦГТЦТТТЦЦАГТАЦГГГАААЦЦТГАЦГТГЦААГЦ 
Тест 6.4 
Ниже приведены 3 правильных ответа для 6 задач (4.9 – 4.14). 
Поставьте в ответах те номера задач, которые им соответствуют 
.   
 
  Г  А  Т   Ц 
 
 
 
 
 
 
 
 
.  Первые  20  нуклеотидов  во  фрагменте  ДНК  человека  длиной  50 
нуклеотидов 
будут 
иметь 
следующую 
последовательность: 
ТАТЦАГАТЦТГЦААЦТЦАТА. 
. 
Коэффициент 
специфичности 
нуклеотидного 
состава 
по 
результатам анализа 50 нуклеотидов в данном рестрикционном фрагменте 
ДНК человека составит  0,66. 

 

  
  Г
   
Г  А 
А  
  Т 
Т  
   Ц
   
 
 
 


140 Гончаренко Г. Г.  Основы  генетической  инженерии  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 



<< предыдущая страница