bigpo.ru
добавить свой файл
  1 ... 54 55 56 57 58




Гончаренко Г. Г.  Основы  генетической  инженерии  
131
 
 
EcoRI 
EcoRI 
EcoRI 




31 
32 
21 
22 
23 
HindIII 
HindIII 
HindIII 
Г 
А 
В 
Б 
.  
 


R
есь 
 
co
am
м
E
B
С
 
 
5 kb 
 
 
 
 
 
 
Тест 3.4 
Ниже  приведены  3  правильных  ответа  для  задач  4.9  –  4.15. 
Поставьте в ответах те номера задач, которые им соответствуют.  
. Выявить мутацию, приводящую к заболеванию, можно достаточно 
легко 
используя 
молекулярно-генетические 
методы. 
Для 
этого 
индивидуальные  образцы  ДНК  необходимо  обработать  рестриктазой 
EcoRI.  Затем,  полученные  рестрикционные  фрагменты  подвергнуть 
электрофоретическому 
фракционированию 
в 
агарозном 
геле 
с 
последующей  Саузерн-блот  гибридизацией,  используя  в  качестве  зонда 
меченый фрагмент специфической ДНК. 
Поскольку  в  результате  мутационной  замены  нуклеотида  в  ДНК 
гена, 
обуславливающего 
заболевание
происходит 
потеря 
сайта 
рестрикции  для  EcoRI,  который  присутствует  в  нормальном  гене,  то  на 
авторадиограмме 
образцов
взятых 
у 
здоровых 
людей, 
будут 
присутствовать  две  фракции.    В  тоже  время  в  образцах,  взятых  у  людей, 
являющихся  носителями  заболевания  циклический  фиброз,  будет 
присутствовать дополнительная «тяжелая» (неразрезанная) фракция ДНК. 
.  Старший  сын  является  носителем  заболевания  циклический 
фиброз. 
Оба родителя являются носителями заболевания. 
Все нормальные братья и сестры являются носителями. 



132 Гончаренко Г. Г.  Основы  генетической  инженерии  
 
4. Плазмидные вектора – специальные устройства для           
доставки и клонирования чужеродных генов  
Тест 4.1 
Ниже  приведены  4  правильных  ответа  для  8  задач  (4.1  –  4.8). 
Поставьте в ответах те номера задач, которые им соответствуют.  
.  Нет, поскольку во фрагменте отсутствует сайт для EcoR I. 
.  Второй с помощью рестриктазы Нind III. 
.  Можно. Первый с использованием EcoR I, второй – Hind III. 
.  Так  как  трансформированные  бактерии  не  растут  на  среде, 
содержащей  тетрациклин,  то  можно  предположить,  что  в  плазмидной 
ДНК  вставкой  поврежден  ген  устойчивости  к  этому  антибиотику. 
Следовательно,  из  плазмиды  нужный  нам  фрагмент  можно  «вырезать» 
при помощи рестриктазы Bam I. 
.  Первый. 
Тест 4.2 
Ниже  приведены  еще  3  правильных  ответа  для  6  задач  (4.9-
4.14).  Поставьте  в  ответах  те  номера  задач,  которые  им 
соответствуют.  
.  Гибридизация  меченого  зонда  произойдет  с  фракциями  ДНК 
величиной 4 и 2 кб. 
. Гибридизация  произойдет с фракциями ДНК величиной 4 и 1 кб. 
. 
  
й
  
о
й
н
о
 
н  
ен
К
о
К
Н
ез 
ен
о Н
Д
Б
Д
стр
 в
стр
в
С
2.7 kb 
1 kb 
 
.  



Гончаренко Г. Г.  Основы  генетической  инженерии  
133
 
 
  
й
  
о
й
н
о
 
н  
ен
К
о
К
Н
ез 
ен
о Н
Д
Б
Д
стр
 в
стр
в
С
1.7 kb 
1 kb 
Тест 4.3 
Ниже приведены еще 4 правильных ответа для 8 задач (4.1-4.8). 
Поставьте в ответах те номера задач, которые им соответствуют.  
. а
Оба. Первый при помощи рестриктазы EcoR I, второй при помощи 
рестриктазы Hind III. 
.  При  помощи  фермента  Bam  I.  Бактерии,  трансформированные 
такой плазмидой, не будут расти на средах, содержащих тетрациклин. 
.    Поскольку  белок  состоит  из  300  аминокислот,  то  величина  гена 
Ms  будет  900  нуклеотидных  пар,  а  тандемная  копия  составит  900    2  = 
1800  нп.  Следовательно,  тандемная  копия  гена  Ms  может  находиться 
только во фрагменте 3.  
Только один. При помощи рестриктазы Hae II. 
Тест 4.4 
Ниже  приведены  еще  3  правильных  ответа  для  6  задач  (4.9-
4.14).  Поставьте  в  ответах  те  номера  задач,  которые  им 
соответствуют.  
. На первом этапе необходимо определить в какое место в плазмиде 
наиболее 
оптимально 
можно 
встроить 
ген, 
нужный 
нам 
для 
последующего клонирования. Фрагмент ДНК грибка Podospora, который 
содержит ген β-тубулина, можно встроить при помощи рестриктазы HaeII. 
Для  этого  ДНК  грибка  и  плазмиду  нужно  обработать  рестрикционным 
ферментом    HaeII,  произвести  гибридизацию  линейной  молекулы 
плазмиды  и  ДНК    Podospora  с  последующим  сшиванием  лигазой. 
Полученной  гибридной  плазмидой  трансформировать  E.  coli.  Далее, 
трансформированные  бактериии  выращивать  на  среде,  содержащей 


<< предыдущая страница   следующая страница >>